Komponentai agliutinacijos reakcijai nustatyti. Pagreitintos agliutinacijos reakcijų parinktys

Agliutinacijos reakcija pagrįsta specifine antikūnų (agliutininų) sąveika su ištisomis mikrobų ar kitomis ląstelėmis. Dėl šios sąveikos susidaro aglomerato dalelės, kurios nusėda (agliutinuoja). Agliutinacijos reakcijoje gali dalyvauti bakterijos, pirmuonys, grybai, mielės, riketsijos, eritrocitai ir kitos ląstelės, gyvos ir žuvusios. Reakcija vyksta dviem fazėmis: pirmoji – specifinis antigeno ir antikūno derinys, antroji – nespecifinė, t.y. susidaro matomas agliutinatas. Agliutinato nusodinimas vyksta esant elektrolitams, pvz., natrio chloridui. Agliutinate esantys mikroorganizmai išlieka gyvi, bet praranda judrumą.

Agliutinacijos reakcija plačiai naudojama serologinei infekcinių ligų diagnostikai ir izoliuotų mikrobų antigeninei struktūrai nustatyti. Iš paciento ar nešiotojo kūno išskirto patogeno antigeninei struktūrai nustatyti naudojamas specifinis imuninis serumas, gaunamas imunizuojant gyvūnus (triušį, asilą, avis) tam tikrais mikroorganizmais. Mikrobo identifikavimas atliekamas agliutinacijos reakcijos metu ant stiklo su adsorbuotais arba monoreceptoriniais serumais arba mėgintuvėliuose su specifiniais agliutinuojančiais serumais. Adsorbuotuose serumuose yra antikūnų tik prieš tam tikram mikrobui būdingus antigenus, o monoreceptoriniuose serumuose yra antikūnų tik vienam specifiniam patogeno antigenui.

Rūšių serumuose yra antikūnų prieš visus konkretaus mikrobo antigenus.

Išskirtos mikroorganizmų kultūros priklausymas tam tikrai rūšiai nustatomas agliutinuojant su žinomu serumu iki antikūnų titro, nurodyto serumo ampulės etiketėje. Serumo antikūnų titras laikomas paskutiniu jo skiedimu, kuriame vis dar stebima mikrobų kultūros, naudotos gyvūnui imunizuoti, agliutinacija. Adsorbuoti ir monoreceptoriniai serumai paprastai naudojami neskiesti stiklo agliutinacijos reakcijoje.

Nustatant antikūnų buvimą paciento kraujo serume, jis skiedžiamas izotoniniu natrio chlorido tirpalu, praskiedus nuo 1:50 iki 1:800 ar daugiau. Į kiekvieną praskiedimą pridedama gyvų arba nužudytų mikrobų suspensija. Preparatai, kurių sudėtyje yra mikrobų, nužudytų karščiu ar formaldehidu, vadinami diagnostiniais preparatais. Kaitinant mikroorganizmų kultūras gautose diagnostikose yra tik somatinių antigenų. Naudojant tik formaldehidą, mikrobai išlaiko savo žvynelių antigenus.

Esant antikūnams paciento kraujyje, reakcijos metu paimta diagnostika sulimpa ir ant dviejų mėgintuvėlių susidaro nuosėdos (agliutinatas). Šiuo atveju agliutinacijos reakcijos rezultatai laikomi teigiamais. Kontroliniame mėgintuvėlyje, į kurį įpilama izotoninio natrio chlorido tirpalo ir diagnostikos, mikrobų suspensija turi būti vienalytė (neigiama agliutinacijos reakcija).

Į agliutinacijos reakcijos rezultatus sergant kai kuriomis ligomis, pavyzdžiui, leptospiroze, atsižvelgiama tik mikroskopiškai tamsiame mikroskopo matymo lauke (mikroagliutinacija). Norint nustatyti serologinę ligos diagnozę, atsižvelgiama į diagnostinę ligą. Paprastai jis atitinka serumo praskiedimą 1:100 arba 1:200.

Antikūnus paciento kraujo serume galima aptikti naudojant agliutinacijos reakciją sergant vidurių šiltine ir paratifu (Vidal reakcija), brucelioze (Wright reakcija), tuliaremija ir kt.
Castellani reakcija. Sergant kai kuriomis infekcinėmis ligomis arba imunizuojant mikroorganizmais, turinčiais grupinių antigenų, kraujo serume, be specifinių tam tikram tipui antikūnų, atsiranda ir grupinių antikūnų. Tokiu atveju susidaręs serumas agliutinuos giminingų bakterijų rūšis.

Castellani pasiūlė grupinių antikūnų adsorbcijos iš imuninių serumų metodą, pagrįstą jų pašalinimu su giminingų rūšių mikroorganizmais, kurie turi grupinių antigenų, bet neturi specifinių. Tokių mikroorganizmų kultūra, dedama į serumą, adsorbuoja nespecifinės grupės antikūnus, o pašalinus antigeno-antikūno kompleksą centrifuguojant, serume lieka tik specifiniai imunoglobulinai. Serumai, apdoroti Castellani metodu, gali būti naudojami agliutinacijos reakcijoje kaip labai specifiniai.

Agliutinacija – tai mikrobų ar kitų ląstelių sulipimas ir nusodinimas veikiant antikūnams, esant elektrolitui (izotoniniam natrio chlorido tirpalui). Sulipusių bakterijų (ląstelių) grupės vadinamos agliutinatais. Agliutinacijos reakcijai reikalingi šie komponentai:

1. Antikūnai (agliutininai), kurie randami sergančio ar imunitetą turinčio gyvūno serume.

2. Antigenas – gyvų arba žuvusių mikrobų, raudonųjų kraujo kūnelių ar kitų ląstelių suspensija.

3. Izotoninis (0,9%) natrio chlorido tirpalas.

Agliutinacijos reakcija serodiagnostikai naudojama esant vidurių šiltinei ir paratifui (Vidal reakcija), bruceliozei (Wright ir Heddlesono reakcijai), tuliaremijai ir kt. Antikūnas yra paciento serumas, o antigenas yra žinomas mikrobas. Identifikuojant mikrobus ar kitas ląsteles, jų suspensija naudojama kaip antigenas, o žinomas imuninis serumas – kaip antikūnas. Ši reakcija plačiai naudojama diagnozuojant žarnyno infekcijas, kokliušą ir kt.

RA inscenizacijos metodai

Apytikslis RA ant stiklo

Dislokuotas RA

(tūrio metodas)

Koagliutinacijos reakcija

Išlankstytas RA ant stiklo (seridentifikacija)

Agliutinacijos reakcija ant stiklo. Du lašai specifinio (adsorbuoto) serumo ir lašas izotoninio natrio chlorido tirpalo užlašinami ant neriebaus stiklelio. Neadsorbuoti serumai iš anksto skiedžiami santykiu 1:5 – 1:100. Lašai turi būti užlašinami ant stiklo taip, kad tarp jų būtų atstumas. Kultūra kruopščiai sumalama ant stiklo kilpa arba pipete, po to įlašinama į lašą izotoninio natrio chlorido tirpalo ir į vieną iš serumo lašų, ​​kiekvieną maišant, kol susidaro vienalytė suspensija. Serumo lašas be kultūros yra serumo kontrolė.

Dėmesio! Negalite perkelti kultūros iš serumo į izotoninio natrio chlorido tirpalo lašą, kuris yra antigeno kontrolė. Reakcija vyksta kambario temperatūroje 1-3 minutes. Jei serumo kontrolė išlieka skaidri, antigeno kontrolėje pastebimas vienodas drumstumas, o laše, kur kultūra sumaišoma su serumu skaidraus skysčio fone, atsiranda agliutinato dribsnių, reakcijos rezultatas laikomas teigiamu.

Diagnostinė fiziologinė

serumas + kultūros tirpalas + kultūra

Detali agliutinacijos reakcija (tūrio metodas). Paruošiami serijiniai, dažniausiai dvigubi, serumo skiedimai. Metodas vadinamas tūriniu. Norėdami nustatyti antikūnų titrą kraujo serume, paimkite 6 mėgintuvėlius. Į pirmąjį mėgintuvėlį įpilkite 1 ml pradinio serumo praskiedimo santykiu 1:50 ir graduota pipete įpilkite 1 ml fiziologinio tirpalo į visus 6 mėgintuvėlius. Pirmajame mėgintuvėlyje serumas praskiedžiamas santykiu 1:100, o tūris yra 2 ml. Perkelkite 1 ml iš pirmojo mėgintuvėlio į antrąjį mėgintuvėlį, kur praskiedimas tampa 1:200. Taigi pirmuose 5 mėgintuvėliuose atlikite serijos serumo praskiedimus (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Iš penktojo mėgintuvėlio įpilkite 1 ml į dezinfekavimo tirpalą. Į visus 6 mėgintuvėlius įlašinkite 2 lašus diagnostikos. Šeštasis mėgintuvėlis yra kultūros kontrolė, nes jame yra tik fiziologinis tirpalas ir diagnostinė medžiaga.

Tokia kontrolė būtina, kad būtų išvengta spontaniškos kultūros agliutinacijos. Mėgintuvėliai suplakami ir dedami į termostatą 37°C temperatūroje 2 valandoms, o po to paliekami parai kambario temperatūroje, po to registruojami agliutinacijos reakcijos rezultatai. Atliekant agliutinacijos reakciją su vaikų serumais pirmaisiais gyvenimo mėnesiais, dėl antikūnų susidarymo funkcinio prastumo, būtina nustatyti mažesnius antikūnų titrus, į kuriuos atsižvelgiama skiedžiant serumą. Pradinis serumo praskiedimas yra 1:25. Pirmajame mėgintuvėlyje gaunamas praskiedimas 1:50, po to 1:100 ir t.t.

Jei reakcijos rezultatas yra teigiamas, mėgintuvėliuose skaidraus skysčio fone matomos įstrigusios ląstelės grūdelių arba dribsnių pavidalu. Agliutinatas palaipsniui nusėda į dugną „skėčio“ pavidalu, o virš nuosėdų esantis skystis tampa skaidrus. Antigeno kontrolė yra tolygiai drumsta.

Pagal nuosėdų pobūdį išskiriama smulkiagrūdė ir stambiagrūdė (dribsniai) agliutinacija. Dirbant su O-serumu gaunama smulkiagrūdė agliutinacija. Stambiagrūdis – kai judrūs mikrobai sąveikauja su žvynelių H serumais. Jis atsiranda greičiau nei smulkiagrūdis, o susidarančios nuosėdos yra labai birios ir lengvai lūžta.

Reakcijos intensyvumas išreiškiamas taip:

Visos ląstelės nusistovėjo, skystis mėgintuvėlyje yra visiškai skaidrus. Reakcijos rezultatas yra labai teigiamas;

Mažiau nuosėdų, skystis iki galo neišsivalo. Reakcijos rezultatas yra teigiamas;

Nuosėdų dar mažiau, skystis drumstesnis. Reakcijos rezultatas abejotinas;

Mėgintuvėlio apačioje yra nedidelių nuosėdų, skystis drumstas. Abejotinas reakcijos rezultatas;

Nėra nuosėdų, skystis yra tolygiai drumstas, kaip ir antigeno kontrolėje. Neigiamas reakcijos rezultatas

Kraujo agliutinacija yra raudonųjų kraujo kūnelių, bakterijų ir kitų ląstelių, turinčių antigenus, sulipimas ir nusėdimas.

Procesas vyksta veikiant agliutininams, kurie yra specifinės medžiagos. Šios medžiagos yra lektinai arba antikūnai.

Galimos agliutinacijos rūšys nustatant kraujo grupę

Agliutinacija gali būti specifinė arba nespecifinė. Pirmuoju atveju reakcija vyksta dalyvaujant trims komponentams:

• antigenai;
• antikūnai;
• elektrolitų (naudokite izotoninį tirpalą).

Kraujo grupei nustatyti naudojami visi įmanomi agliutinacijos tipai, tačiau tai nėra vienintelis atvejis.

Kokiam tikslui jis naudojamas?

Kraujo agliutinacijos reakcija naudojama infekcinės ligos sukėlėjui nustatyti. Tuo pačiu metu jis nusėda ir lengvai aptinkamas nuosėdose. Šis procesas naudojamas, kaip minėta aukščiau, ir apie tai bus kalbama toliau.

Kokios yra savybės?

Raudonuosiuose kraujo kūneliuose yra A ir B tipo antigenų. Jie atitinkamai jungiasi su antikūnais ά ir β. Kraujo grupės ir agliutinacijos reakcijos:

• 1, 0 (ά, β) - raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje nėra antigenų;
• 2, A (β) - yra antigenas A ir antikūnas β;
• 3, B (ά) – yra antigeno B ir antikūno ά;
• 4, AB (00) - yra du antigenai, antikūnų nėra.

Verta paminėti, kad antigenai jau yra pastebėti embrione. Kalbant apie antikūnus, jie atsiranda po gimimo, pirmąjį gyvenimo mėnesį.

Žmonių suderinamumas priklauso nuo kraujo grupės. Tai yra priežastis, dėl kurios motinos kūnas atmetė vaisius. Kitaip tariant, ji turi antikūnų prieš negimusio vaiko kraujo antigenus. Tokiu atveju atsiranda nesuderinamumas. Be to, perpylimo metu reikia atsižvelgti į kraujo grupę.

Paruošimas

Kraujo grupės ir agliutinacijos reakcijos yra suderinamos sąvokos, kurios dažnai naudojamos medicinoje.

Prieš atliekant tyrimą svarbu laikytis tam tikrų nurodymų. Turėtumėte laikinai susilaikyti nuo tam tikrų maisto produktų ir vaistų vartojimo. Tai padės gauti tikslesnius rezultatus. Rekomendacijas, kurių reikia laikytis, nustato gydytojas. Faktas yra tas, kad skirtingose ​​​​laboratorijose gali būti ne tas pats gautų verčių diapazonas, tai yra, jos šiek tiek skiriasi.

Testo sąlygos

Kad kraujo grupė būtų nustatyta tiksliai, svarbu pasirinkti tinkamą įrangą. Jie apima:

• ir pipetė;
• stiklo strypai;
• standartiniai izohemagliutinuojantys serumai;
• sausos molio plokštės, kurios suskirstytos į 4 sektorius.

Taip pat yra reikalavimai bandymo sąlygoms:

• dienos apšvietimas;
• kambario temperatūra virš +16 ˚С;
• naudojant kraujo ir serumo tūrius santykiu 1:10;
• patikimi rezultatai gaunami per 5 minutes.

Aukščiau pateikiamos pagrindinės sąlygos ir įrankiai. Kraujo agliutinacija gali būti atliekama keliais būdais, ir kiekvienas iš jų turi individualius reikalavimus.

Metodai

Galimi kraujo grupės nustatymo metodai naudojant agliutinaciją:

• standartinis metodas;
• kryžminė reakcija;
• zoliklonų naudojimas;
• greitasis metodas naudojant „Erythrotest-group card“ rinkinį.

Standartinis metodas

Kraujo agliutinacija parodoma naudojant paciento raudonuosius kraujo kūnelius. Taip pat naudojami standartiniai serumai, kuriuose yra žinomų antigenų.

Ant plokščios lėkštelės užlašinkite 1 lašą keturių serumų. Tada, naudojant stiklines lazdeles, į jį įpilamas paciento kraujas, kurį reikia ištirti. Šiuo atveju patogu naudoti akių lašintuvus. Santykis turi būti 1:10. Serumas ir kraujas kruopščiai sumaišomi. Vertinimas gali būti atliktas per penkias minutes.

Bandymo rezultatų dekodavimas paprastu metodu

Pasibaigus nurodytam laikui, serumo lašuose pastebimas valymas. Vienuose matote, kad įvyko raudonųjų kraujo kūnelių agliutinacija (maži dribsniai), kitose jos nėra.

Yra šios parinktys:

• nėra reakcijos visuose serumo mėginiuose – 1 grupė;
• koaguliacija įvyko visur, išskyrus 2 mėginį – 2 grupę;
• jokios reakcijos tik 3 imtyje - 3 grupė;
• agliutinacija įvyko visur – 4 grupėje.

Taigi, svarbiausia teisingai paskirstyti serumus. Tada iššifruoti rezultatą nebus sunku. Jei kraujo agliutinacija silpna, rekomenduojama tyrimą kartoti. Esant mažiems dribsniams, jie tiriami mikroskopu.

Kryžminė reakcija

Kartais paprastu būdu neįmanoma tiksliai nustatyti kraujo grupės. Agliutinacija šiuo atveju atliekama naudojant kryžminės reakcijos metodą. Skirtingai nuo pirmosios testo versijos, čia svarbūs standartiniai raudonieji kraujo kūneliai. Paciento kraujas paimamas į mėgintuvėlį, centrifuguojamas, o vėliau serumas pipete išpumpuojamas tolesniam tyrimui.

Jo po 2 lašus įlašinama į lėkštę, po to įpilama standartinių A ir B grupių raudonųjų kraujo kūnelių.Turinys išmaišomas purtant indą.

Kryžminės reakcijos metodo rezultatai

Po penkių minučių mėginiai yra paruošti tyrimui. Galimos šios parinktys:

• klijavimas įvyko abiejuose lašuose - 1 grupė;
• dribsnių nepastebėta nė viename mėginyje – 4 grupė;
• procesas matomas viename mėginyje – 2 arba 3 grupės (priklausomai nuo to, kur tiksliai krešėjo kraujas).

Metodas naudojant zoliklonus

Norint nustatyti kraujo grupę, agliutinacija tokiu būdu atliekama naudojant sintetinius serumo pakaitalus. Jie vadinami zoliklonais. Juose yra dirbtinių ά ir β-agliutinų pakaitalų, vadinamų eritrotestais (atitinkamai rožinės ir mėlynos spalvos). Reakcija vyksta tarp jų ir paciento raudonųjų kraujo kūnelių.

Šis metodas yra tiksliausias ir patikimiausias. Iš esmės tyrimo kartoti nereikia. Rezultatai vertinami taip pat, kaip ir standartinio metodo atveju. Ypatumas yra tas, kad tai turi būti patvirtinta reakcija su konkrečiu sintetiniu pakaitalu (anti-AV). Be to, įpilant natrio chlorido tirpalo nėra sukibimo.

Express metodas su „Erythrotest-group card“ rinkiniu

Svarstant galimus kraujo grupės nustatymo analizės metodus, verta paminėti, kad šis metodas turi savo ypatybes. Jie slypi tame, kad rezultatą galima įvertinti ne tik laboratorijoje, bet ir lauke. Tyrimui atlikti naudojamas specialus rinkinys. Jame yra kortelė su šuliniais, kurių apačioje jau yra išdžiovinti reagentai. Be anti-AB, anti-A ir anti-B, Rh faktoriui nustatyti naudojamas anti-D.

Šis metodas nereikalauja specialaus paruošimo, galima naudoti iš piršto paimtą kraują, kuriame gali būti konservantų. Pirmiausia į kiekvieną šulinį reikia įpilti lašelį vandens, kad ištirptų ingredientai. Po to įpilama kraujo ir lengvai pamaišoma. Po trijų minučių bus gautas rezultatas.

Klaidinga agliutinacija

Kartais po testo gauti duomenys nėra teisingi. Šis reiškinys priklauso nuo tam tikrų veiksnių.

Yra trijų tipų klaidingos reakcijos:

Pseudoagliutinacija. Tikrasis klijavimas nevyksta; raudonieji kraujo kūneliai tiesiog susilanksto į monetų stulpelius. Jei įlašinsite porą lašų fiziologinio tirpalo, jie suyra. Panašų reiškinį galima atpažinti ir mikroskopu.

Šalto kraujo agliutinacija. Ši reakcija stebima, jei tyrimo atlikimo sąlygos buvo nepalankios. Kai temperatūra žemesnė nei +16˚C, gali susidaryti klijavimas.

Panagliutinacija. Jei kraujyje yra infekcija, tyrimo rezultatai gali būti klaidingi. Šis reiškinys galimas ir sergant vėžiu bei sepsiu.

Agliutinacija yra labai svarbi medicinoje. Tai leidžia ne tik nustatyti kraujo grupę, bet ir nustatyti ligų sukėlėją, taip pat infekcijų buvimą. Svarbiausia yra laikytis gydytojo rekomendacijų ruošiantis šiai procedūrai. Kalbant apie medicinos personalą, jų užduotis yra sudaryti palankias sąlygas ir laikytis visų taisyklių. Tik taip galima pasiekti tikslių rezultatų atliekant kraujo agliutinaciją.

Agliutinacijos reakcija

Agliutinacija (lot. agliutinacija– klijavimas) – antigeną turinčių korpuskulinių dalelių (visų ląstelių, latekso dalelių ir kt.) suklijavimas (sujungimas) su specifinių antikūnų molekulėmis, dalyvaujant elektrolitams, kuris baigiasi dribsnių ar nuosėdų (agliutinato) susidarymu, matomu plika akimi. Nuosėdų pobūdis priklauso nuo antigeno pobūdžio: žiuželinės bakterijos gamina stambias pūslelines nuosėdas, nepūliuojančios ir nekapsulinės bakterijos gamina smulkiagrūdes nuosėdas, o kapsulinės – stygas. Skiriama tiesioginė agliutinacija, kurios metu savi bakterijos ar bet kurios kitos ląstelės, pavyzdžiui, eritrocitų, antigenai tiesiogiai dalyvauja sąveikoje su specifiniais antikūnais; ir netiesioginis, arba pasyvus, kai bakterijų ląstelės ar eritrocitai, arba latekso dalelės yra ne savo, o ant jų sorbuotų svetimų antigenų (ar antikūnų) nešiotojai, siekiant nustatyti jiems specifinius antikūnus (ar antigenus). Agliutinacijos reakcija daugiausia apima antikūnus, priklausančius IgG ir IgM klasėms. Jis vyksta dviem etapais: pirma, atsiranda specifinė sąveika tarp aktyvaus antikūnų centro ir antigeną lemiančio faktoriaus; ši stadija gali įvykti ir nesant elektrolitų, be matomų pokyčių reaguojančioje sistemoje. Antrajam etapui - agliutinato susidarymui - būtinas elektrolitų buvimas, kuris sumažina antigeno + antikūnų kompleksų elektrinį krūvį ir pagreitina jų klijavimo procesą. Ši fazė baigiasi agliutinato susidarymu.

Agliutinacijos reakcijos atliekamos ant stiklinių arba lygių kartoninių plokštelių arba steriliuose agliutinacijos mėgintuvėliuose. Agliutinacijos reakcijos (tiesioginės ir pasyvios) ant stiklo dažniausiai naudojamos kaip pagreitintas metodas specifiniams antikūnams paciento serume nustatyti (pavyzdžiui, sergant brucelioze) arba serologiniam patogeno identifikavimui. Pastaruoju atveju dažniausiai naudojami gerai išgryninti (adsorbuoti) diagnostiniai serumai, kuriuose yra tik monoreceptorių antikūnų arba jų rinkinys prieš įvairius antigenus. Neabejotinas agliutinacijos reakcijos ant stiklo pranašumas yra jos įgyvendinimo paprastumas ir tai, kad tai trunka kelias minutes ar net sekundes, nes abu komponentai naudojami koncentruota forma. Tačiau jis turi tik kokybinę vertę ir yra mažiau jautrus nei mėgintuvėlis. Išsami agliutinacijos reakcija mėgintuvėliuose suteikia tikslesnius rezultatus, nes leidžia nustatyti kiekybinį antikūnų kiekį serume (nustatyti jo titrą) ir, jei reikia, užregistruoti antikūnų titro padidėjimo faktą, kuris turi diagnostinę reikšmę. . Norėdami nustatyti reakciją, į agliutinaciją įpilkite serumo, tam tikru būdu atskiesto 0,85% NaCl tirpalu ir tokio pat tūrio (paprastai 0,5 ml) standartinės diagnostinės medžiagos (arba tiriamosios kultūros), kurios 1 ml yra 1 milijardas bakterijų, suspensijos. vamzdeliai. Agliutinacijos reakcijos rezultatai registruojami pirmiausia po 2 valandų inkubavimo mėgintuvėliuose 37 °C temperatūroje ir galiausiai po 20–24 valandų pagal du kriterijus: nuosėdų buvimą ir dydį bei filtro skaidrumo laipsnį. supernatanto skystis. Vertinimas atliekamas pagal keturių kryžių sistemą. Reakciją būtinai lydi serumo ir antigeno kontrolė. Tais atvejais, kai serologiniam sukėlėjo nustatymui atliekama detali agliutinacijos reakcija mėgintuvėlyje, ji turi diagnostinę vertę, jei reakcija vertinama teigiama, kai diagnostinis serumas praskiedžiamas ne mažiau kaip iki pusės titro.

Reikia atsižvelgti į tai, kad maišant homologinių antigenų ir antikūnų tirpalus ne visada pastebimi matomi agliutinacijos reakcijos pasireiškimai. Nuosėdos susidaro tik esant tam tikram optimaliam abiejų reakcijos komponentų santykiui. Už šių ribų, esant dideliam antigeno ar antikūnų pertekliui, reakcijos nepastebima. Šis reiškinys vadinamas „prozono reiškiniu“. Jis stebimas tiek agliutinacijos, tiek kritulių reakcijos metu. Prozono atsiradimas imuninėse reakcijose paaiškinamas tuo, kad jose dalyvaujantys antigenai, kaip taisyklė, yra polideterminantiniai, o IgG antikūnų molekulės turi du aktyvius centrus. Esant antikūnų pertekliui, kiekvienos antigeno dalelės paviršius pasidengia antikūnų molekulėmis, kad neliktų laisvų determinantų grupių, todėl antrasis, nesurištas aktyvusis antikūnų centras negali sąveikauti su kita antigeno dalele ir surišti jų vienas su kitu. Matomo agliutinato ar nuosėdų susidarymas taip pat slopinamas, kai yra antigeno perteklius, kai nelieka nei vieno laisvo aktyvaus antikūnų centro, todėl antigeno + antikūno + antigeno kompleksai nebegali padidėti.

Imunodiagnostinės reakcijos. Antigeno-antikūnų reakcijos ir reakcijos su pažymėtais komponentais. Naudojimas mikroorganizmų identifikavimui ir infekcinių ligų diagnostikai.

Imuninės reakcijos naudojamos atliekant diagnostinius ir imunologinius ligonių ir sveikų žmonių tyrimus. Šiuo tikslu jie naudoja serologiniai metodai(iš lat. serumas - išrūgų ir logotipai - mokymas), tai yra antikūnų ir antigenų tyrimo metodai, naudojant antigeno-antikūno reakcijas, nustatytas kraujo serume ir kituose skysčiuose, taip pat kūno audiniuose.

Antikūnų prieš patogenų antigenus aptikimas paciento kraujo serume leidžia diagnozuoti ligą. Serologiniais tyrimais taip pat nustatomi mikrobų antigenai, įvairios biologiškai aktyvios medžiagos, kraujo grupės, audinių ir navikų antigenai, imuniniai kompleksai, ląstelių receptoriai ir kt.

Išskiriant mikrobą iš paciento, patogenas nustatomas tiriant jo antigenines savybes naudojant imuninės diagnostikos serumus, t. y. hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumus, kuriuose yra specifinių antikūnų. Tai yra vadinamasis serologinis identifikavimas mikroorganizmai.

Mikrobiologijoje ir imunologijoje plačiai naudojamos agliutinacijos, nusodinimo, neutralizavimo reakcijos, reakcijos su komplementu, naudojant žymėtus antikūnus ir antigenus (radioimunologinis, fermentinis imunologinis tyrimas, imunofluorescenciniai metodai). Išvardytos reakcijos skiriasi registruotu poveikiu ir gamybos technika, tačiau visos jos yra bazinės. yra pagrįsti antigeno sąveikos su antikūnu reakcija ir yra naudojami tiek antikūnams, tiek antigenams aptikti. Imuninės reakcijos pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu.

Žemiau pateikiami pagrindinių imunodiagnostinių reakcijų principai ir diagramos. Pateikta išsami reakcijų nustatymo technika. praktinės imunodiagnostikos gairės.

Agliutinacijos reakcija – RA(iš lat. agluti- natio- adhezija) – tai paprasta reakcija, kurios metu antikūnai suriša korpuskulinius antigenus (bakterijas, eritrocitus ar kitas ląsteles, netirpias daleles su ant jų adsorbuotais antigenais, taip pat stambiamolekulinius agregatus). Jis atsiranda esant elektrolitams, pavyzdžiui, kai pridedamas izotoninis natrio chlorido tirpalas.

Naudojami įvairūs agliutinacijos reakcijos variantai: ekstensyvi, orientacinė, netiesioginė ir kt. Agliutinacijos reakcija pasireiškia dribsnių ar nuosėdų susidarymu

RA naudojamas:

antikūnų nustatymas pacientų kraujo serume, pavyzdžiui, sergančių brucelioze (Wright, Heddelson reakcija), vidurių šiltine ir paratifu (Vidal reakcija) ir kitomis infekcinėmis ligomis;

iš paciento išskirto patogeno nustatymas;

kraujo grupių nustatymas naudojant monokloninius antikūnus prieš eritrocitų aloantigenus.

Paciento antikūnams nustatyti įdėtiišsami agliutinacijos reakcija: pridėti prie paciento kraujo serumo skiedimų diagnostika(žuvusių mikrobų suspensija) ir po kelių valandų inkubavimo 37 °C temperatūroje pažymimas didžiausias serumo praskiedimas (serumo titras), kuriam esant įvyko agliutinacija, t.y. susidarė nuosėdos.

Agliutinacijos pobūdis ir greitis priklauso nuo antigeno ir antikūnų tipo. Pavyzdys – diagnostinių medžiagų (O ir R antigenų) sąveikos su specifiniais antikūnais ypatumai. Agliutinacijos reakcija su O-diagnostika(bakterijos žūsta karščio metu, išlaiko šilumą stabiliai O-antigenas) atsiranda smulkiagrūdės agliutinacijos pavidalu. Agliutinacijos reakcija su H-diagnosticum (bakterijos, naikinamos formaldehidu, išlaikančios termolabų žiuželinį H-antigeną) yra šiurkšti ir vyksta greičiau.

Jei reikia nustatyti iš paciento išskirtą sukėlėją, įdėti orientacinė agliutinacijos reakcija, naudojant diagnostinius antikūnus (agliutinuojantį serumą), t.y. atliekamas patogeno serotipų nustatymas. Orientacinė reakcija atliekama ant stiklelio. Iš paciento išskirta grynoji patogeno kultūra įlašinama į lašą diagnostinio agliutinuojančio serumo, praskiedus santykiu 1:10 arba 1:20. Šalia dedama kontrolė: vietoj serumo užlašinamas lašas natrio chlorido tirpalo. Kai laše, kuriame yra serumo ir mikrobų, atsiranda flokuliuojančių nuosėdų, a plati agliutinacijos reakcija mėgintuvėliuose su didėjančiais agliutinuojančio serumo praskiedimais, į kuriuos įlašinami 2-3 lašai patogeno suspensijos. Į agliutinaciją atsižvelgiama pagal nuosėdų kiekį ir skysčio skaidrumo laipsnį. Reakcija laikoma teigiama, jei agliutinacija stebima praskiedimu, artimu diagnostinio serumo titrui. Tuo pačiu metu atsižvelgiama į kontrolę: izotoniniu natrio chlorido tirpalu praskiestas serumas turi būti skaidrus, mikrobų suspensija tame pačiame tirpale turi būti tolygiai drumsta, be nuosėdų.

Skirtingos susijusios bakterijos gali būti agliutinuojamos naudojant tą patį diagnostinį agliutinuojantį serumą, todėl jas sunku nustatyti. Todėl jie naudoja adsorbuoti agliutinuojantys serumai, iš kurių kryžmiškai reaguojantys antikūnai buvo pašalinti adsorbuojant giminingoms bakterijoms. Tokie serumai išlaiko antikūnus, būdingus tik tam tikrai bakterijai. Specialių monoreceptorių diagnostinių agliutinuojančių serumų gamybą pasiūlė A. Castellani (1902).

Netiesioginė (pasyvi) hemagliutinacijos reakcija (RNGA, RPGA) yra pagrįstas eritrocitų panaudojimu su antigenais arba ant jų paviršiaus adsorbuotais antikūnais, kurių sąveika su atitinkamais kraujo serumo antikūnais ar antigenais priverčia eritrocitus sulipti ir iškristi į tyrimo dugną. vamzdelis ar ląstelė Všukuotų nuosėdų pavidalu (13.2 pav.). Neigiamos reakcijos atveju raudonieji kraujo kūneliai nusėda ■ „mygtuko“ pavidalu. Paprastai antikūnai RNGA aptinkami naudojant antigeninę eritrocitų diagnostiką, tai yra eritrocitai su adsorbuota. įjungta juos su antigenais. Kartais naudojama antikūnų eritrocitų diagnostika, ant kurios adsorbuojami antikūnai. Pavyzdžiui, botulino toksiną galima aptikti į jį įdėjus eritrocitų antikūnų botulino toksino (ši reakcija vadinama atvirkštinė netiesioginė hemagliutinacijos reakcija- RONG). RNGA naudojamas infekcinėms ligoms diagnozuoti ir gonadotropiniam hormonui nustatyti Všlapimas nėštumo metu, siekiant nustatyti padidėjusį jautrumą vaistams, hormonams ir kai kuriais kitais atvejais.

Koagliutinacijos reakcija . Patogeninės ląstelės nustatomos naudojant stafilokokus, iš anksto apdorotus imuninės diagnostikos serumu. Stafilokokai, kurių sudėtyje yra baltymų A, turintis afinitetą Fc - imunoglobulinų fragmentas, nespecifiškai adsorbuoja antimikrobinius antikūnus, kurie vėliau sąveikauja su aktyviais centrais su atitinkamais iš pacientų išskirtais mikrobais. Dėl koaguliacijos susidaro dribsniai, susidedantys iš stafilokokų, diagnostinių serumo antikūnų ir aptikto mikrobo.

Hemagliutinacijos slopinimo reakcija (RTGA) paremta blokada, viruso antigenų slopinimu imuninio serumo antikūnais, dėl ko virusai praranda gebėjimą agliutinuoti raudonuosius kraujo kūnelius (13.3 pav.). RTGA naudojama diagnozuoti daugybę virusinių ligų, kurių sukėlėjai (gripo virusai, tymai, raudonukės, erkinis encefalitas ir kt.) gali agliutinuoti įvairių gyvūnų raudonuosius kraujo kūnelius.

Agliutinacijos reakcija kraujo grupėms nustatyti naudojamas ABO sistemai sukurti (žr. 10.1.4.1 skyrių), naudojant raudonųjų kraujo kūnelių agliutinaciją su imuninio serumo antikūnais prieš kraujo grupės antigenus A (II), B (III). Kontrolė yra: serumas, kuriame nėra antikūnų, t.y. serumas AB (GU) kraujo tipai; antigenai, esantys A (II), B (III) grupių raudonuosiuose kraujo kūneliuose. Neigiama kontrolė neturi antigenų, t.y. naudojami 0 (I) grupės eritrocitai.

IN agliutinacijos reakcijos Rh faktoriui nustatyti(žr. 10.1.4.1 skyrių) naudokite antireus serumą (bent dvi skirtingas serijas). Jei ant tiriamų eritrocitų membranos yra Rh antigeno, atsiranda šių ląstelių agliutinacija. Standartiniai visų kraujo grupių Rh teigiami ir Rh neigiami eritrocitai yra kontrolė.

Agliutinacijos reakcija, skirta anti-reuso antikūnams nustatyti (netiesioginis Kumbso testas)vartojamas pacientams, sergantiems intravaskuline hemolize. Kai kuriems iš šių pacientų aptinkami anti-reuso antikūnai, kurie yra neišsamūs ir monovalentiniai. Jie konkrečiai sąveikauja su Rh teigiamais eritrocitais, bet nesukelia jų agliutinacijos. Tokių nepilnų antikūnų buvimas nustatomas atliekant netiesioginį Kumbso testą. Tam į anti-Rh antikūnų + Rh teigiamų eritrocitų sistemą pridedamas antiglobulino serumas (antikūnai prieš žmogaus imunoglobulinus), kuris sukelia eritrocitų agliutinaciją (13.4 pav.). Naudojant Kumbso reakciją, diagnozuojamos patologinės būklės, susijusios su imuninės kilmės eritrocitų intravaskuline lize, pavyzdžiui, naujagimio hemolizinė liga: Rh teigiamo vaisiaus eritrocitai susijungia su kraujyje cirkuliuojančiais nepilnais Rh faktoriaus antikūnais, per placentą perėjo iš Rh neigiamos motinos.

Kritulių reakcijos

Kritulių reakcija - RP (nuolat. praecipito- nuosėdos) - tai tirpaus molekulinio antigeno komplekso su antikūnais susidarymas ir nusodinimas drumstumo pavidalu, vadinamas nuosėdos. Jis susidaro sumaišius antigenus ir antikūnus lygiaverčiais kiekiais; vieno iš jų perteklius sumažina imuninio komplekso susidarymo lygį.

Nusodinimo reakcijos atliekamos mėgintuvėliuose (žiedo nusodinimo reakcija), geliuose, maistinėse terpėse ir kt. Plačiai paplito nusodinimo reakcijų atmainos pusiau skystuose agaro arba agarozės geliuose: dviguba imunodifuzija pagal Ouchterlony. radialinė imunodifuzija, imunoelektroforezė ir kt.

Žiedo kritulių reakcija . Reakcija vykdoma siauruose nusodinimo mėgintuvėliuose su imuniniu serumu, ant kurio sluoksniuojasi tirpus antigenas. Esant optimaliam antigeno ir antikūnų santykiui, prie šių dviejų tirpalų ribos susidaro nepermatomas nuosėdų žiedas (13.5 pav.). Antigeno perteklius neturi įtakos žiedo nusodinimo reakcijos rezultatui dėl laipsniško reagentų difuzijos iki skysčio ribos. Jei žiedinio nusodinimo reakcijoje kaip antigenai naudojami virti ir filtruoti vandeniniai organų ar audinių ekstraktai, tai ši reakcija vadinama termoprecipitacijos reakcija (Ascoli reakcija, su juodlige/

Dviguba imunodifuzijos reakcija pagal Ouchteruny . Reakcijai nustatyti ištirpęs agaro gelis plonu sluoksniu užpilamas ant stiklinės plokštelės ir jam sukietėjus išpjaunamos 2-3 mm dydžio duobutės. Antigenai ir imuniniai serumai dedami atskirai į šias duobutes, kurios difunduoja viena link kitos. Susitikimo vietoje lygiavertėmis proporcijomis jie sudaro baltos juostelės pavidalo nuosėdas. Daugiakomponentėse sistemose tarp šulinių su skirtingais antigenais ir serumo antikūnais atsiranda kelios nuosėdų linijos; identiškiems antigenams nuosėdų linijos susilieja; netapatiesiems jie susikerta (13.6 pav.).

Radialinė imunodifuzijos reakcija . Imuninis serumas su išlydytu agaro geliu tolygiai pilamas ant stiklinės. Sustingus gelyje, padaromos duobutės, į kurias dedamas įvairiais atskiedais antigenas. Antigenas, difunduodamas į gelį, aplink duobutes su antikūnais suformuoja žiedo formos kritulių zonas (13.7 pav.). Nusodinimo žiedo skersmuo yra proporcingas antigeno koncentracijai. Reakcija naudojama įvairių klasių imunoglobulinų, komplemento sistemos komponentų ir kt. kiekiui kraujyje nustatyti.

Imunoelektroforezė- elektroforezės ir imunoprecipitacijos derinys: į gelio duobutes įvedamas antigenų mišinys ir elektroforezės būdu atskiriamas gelyje. Tada į griovelį lygiagrečiai elektroforezės zonoms įvedamas imuninis serumas, kurio antikūnai, pasklidę į gelį, sudaro kritulių linijas susitikimo su antigenu vietoje.

Flokuliacijos reakcija(pagal Ramonas) (iš lat. flokas - vilnos dribsniai) - opalescencijos arba flokuliuojančios masės (imunoprecipitacijos) atsiradimas mėgintuvėlyje vykstant toksino-antitoksino arba toksoido-antitoksino reakcijai. Jis naudojamas antitoksinio serumo ar toksoido aktyvumui nustatyti.

Imuninė elektroninė mikroskopija- tinkamais antikūnais apdorotų mikrobų, dažnai virusų, elektroninė mikroskopija. Virusai, apdoroti imuniniu serumu, sudaro imuninius agregatus (mikronuosėdas). Aplink virionus susidaro antikūnų „korola“, kontrastuojanti su fosfotungsto rūgštimi ar kitais elektronų optiškai tankiais preparatais.

Reakcijos, apimančios komplementą

Reakcijos, apimančios komplementąyra pagrįsti komplemento aktyvavimu antigeno-antikūno kompleksu (komplemento fiksavimo reakcija, radialinė hemolizė ir kt.).

Komplemento fiksavimo reakcija (RSK) yra tai, kad kai antigenai ir antikūnai atitinka vienas kitą, jie sudaro imuninį kompleksą, į kurį per Fc -antikūno fragmentas yra prijungtas prie komplemento (C), ty komplementas yra surištas antigeno-antikūno komplekso. Jei antigeno-antikūno kompleksas nesusidaro, tai komplementas lieka laisvas (13.8 pav.). RSK vykdoma dviem etapais: 1 fazė – mišinio, kuriame yra trys komponentai antigenas + antikūnas + komplementas, inkubavimas; 2 fazė (indikatorius) - laisvo komplemento aptikimas mišinyje, pridedant prie jo hemolizinę sistemą, susidedančią iš avių eritrocitų ir hemolizinio serumo, kuriame yra antikūnų prieš juos. 1-oje reakcijos fazėje, kai susidaro antigeno-antikūno kompleksas, jungiasi komplementas, o vėliau 2-oje fazėje antikūnais įjautrintų eritrocitų hemolizė nevyks; reakcija teigiama. Jei antigenas ir antikūnas nesutampa (tiriamame mėginyje nėra antigeno ar antikūno), komplementas lieka laisvas ir 2-oje fazėje susijungs su eritrocitų – antieritrocitų antikūnų kompleksu, sukeldamas hemolizę; reakcija neigiama.

RSC naudojamas diagnozuoti daugelį infekcinių ligų, ypač sifilį (Wassermanno reakcija).

Radialinė hemolizės reakcija (RRH) ) dedamas į agaro gelio, kuriame yra avies raudonųjų kraujo kūnelių ir komplemento, šulinėlius. Į gelio šulinėlius įvedus hemolizinį serumą (antikūnus prieš avių raudonuosius kraujo kūnelius), aplink juos susidaro hemolizės zona (dėl radialinės antikūnų difuzijos). Tokiu būdu galima nustatyti komplemento ir hemolizinio serumo aktyvumą, taip pat antikūnus sergančiųjų gripu, raudonuke, erkiniu encefalitu kraujo serume. Tam ant eritrocitų adsorbuojami atitinkami viruso antigenai, o į gelio, kuriame yra šie eritrocitai, šulinėlius pilamas paciento kraujo serumas. Antivirusiniai antikūnai sąveikauja su viruso antigenais, adsorbuotais ant eritrocitų, po to

Tada komplemento komponentai prisijungia prie šio komplekso, sukeldami hemolizę.

Imuninės adhezijos reakcija (IAR) ) yra pagrįstas komplemento sistemos aktyvavimu korpuskuliniais antigenais (bakterijomis, virusais), apdorotais imuniniu serumu. Dėl to susidaro aktyvuotas trečiasis komplemento komponentas (C3b), kuris prisijungia prie korpuskulinio antigeno kaip imuninio komplekso dalis. Eritrocitai, trombocitai ir makrofagai turi C3b receptorius, dėl kurių, sumaišius šias ląsteles su imuniniais kompleksais, turinčiais C3b, įvyksta jų derinys ir agliutinacija.

Neutralizacijos reakcija

Imuninio serumo antikūnai geba neutralizuoti žalingą mikrobų ar jų toksinų poveikį jautrioms ląstelėms ir audiniams, kuris yra susijęs su mikrobų antigenų blokavimu antikūnais, t.y. neutralizavimas. Neutralizacijos reakcija(RN) atliekama įvedant antigeno ir antikūnų mišinį gyvūnams arba jautriems tiriamiesiems objektams (ląstelių kultūrai, embrionams). Nesant žalingo mikroorganizmų ar jų antigenų ar toksinų poveikio gyvūnams ir tiriamiesiems objektams, jie kalba apie neutralizuojantį imuninio serumo poveikį, taigi ir apie antigeno-antikūno komplekso sąveikos specifiškumą (13.9 pav.).

Imunofluorescencinė reakcija – RIF (Coons metodas)

Yra trys pagrindiniai metodo tipai: tiesioginis, netiesioginis (13.10 pav.), su komplementu. Koonso reakcija yra greitas diagnostikos metodas mikrobų antigenams identifikuoti arba antikūnams nustatyti.

Tiesioginis RIF metodas remiasi tuo, kad audinių antigenai arba mikrobai, apdoroti imuniniais serumais su fluorochromais paženklintais antikūnais, gali švytėti fluorescencinio mikroskopo UV spinduliuose.

Bakterijos tepinėlyje, apdorotame tokiu liuminescenciniu serumu, švyti išilgai ląstelės periferijos žalio krašto pavidalu.

Netiesioginis RIF metodas susideda iš antigeno-antikūno komplekso identifikavimo naudojant antiglobulino (anti-antikūno) serumą, pažymėtą fluorochromu. Norėdami tai padaryti, tepinėliai iš mikrobų suspensijos apdorojami antikūnais iš antimikrobinio triušio diagnostinio serumo. Tada mikrobų antigenų nesurišti antikūnai nuplaunami, o ant mikrobų likę antikūnai aptinkami apdorojant tepinėlį antiglobulino (anti-triušio) serumu, pažymėtu fluorochromais. Dėl to susidaro mikrobų + antimikrobinių triušių antikūnų + antitriušių antikūnų kompleksas, paženklintas fluorochromu. Šis kompleksas stebimas fluorescenciniu mikroskopu, kaip ir tiesioginiu metodu.

Fermentinis imunosorbento metodas arba analizė (ELISA)

ELISA -antigenų aptikimas naudojant atitinkamus antikūnus, konjuguotus su žymens fermentu (krienų peroksidaze, beta-galaktozidaze arba šarmine fosfataze). Sujungus antigeną su fermentu pažymėtu imuniniu serumu, į mišinį pridedamas substratas/chromogenas. Substratas yra skaidomas fermento, o reakcijos produkto spalva pasikeičia – spalvos intensyvumas yra tiesiogiai proporcingas surištų antigenų ir antikūnų molekulių skaičiui.

Kietosios fazės ELISA - labiausiai paplitęs imunologinio tyrimo variantas, kai vienas iš imuninės reakcijos komponentų (antigenas arba antikūnai) yra sorbuojamas ant kieto nešiklio, pavyzdžiui, polistireno plokštelių šuliniuose.

Nustatant antikūnus, paciento kraujo serumas, fermentu paženklintas antiglobulino serumas ir fermento substratas (chromogenas) nuosekliai dedami į plokštelių su sorbuotu antigenu šulinėlius.

Kiekvieną kartą, pridėjus kitą komponentą, neprisirišę reagentai pašalinami iš šulinių kruopščiai nuplaunant. Jei rezultatas teigiamas, pasikeičia chromogeno tirpalo spalva. Kietosios fazės nešiklis gali būti jautrinamas ne tik antigenu, bet ir antikūnais. Tada į šulinėlius su sorbuotais antikūnais įpilamas norimas antigenas, įpilamas imuninis serumas prieš antigeną, pažymėtą fermentu, o po to pridedamas fermento substratas.

Konkurencinga ELISA parinktis . tikslinis antigenas ir fermentu pažymėtas antigenas konkuruoja tarpusavyje, kad surištų ribotą imuninio serumo antikūnų kiekį. Kitas tyrimas – antikūnai, kurių ieškote

ir pažymėti antikūnai konkuruoja tarpusavyje dėl antigenų.

Radioimunologinis metodas arba analizė (RIA)

Labai jautrus metodas, pagrįstas antigeno ir antikūno reakcija, naudojant antigenus arba antikūnus, paženklintus radionuklidu (125 J, 14 C, 3 H, 51 Cr ir kt.). Po jų sąveikos susidaręs radioaktyvus imuninis kompleksas yra atskiriamas ir jo radioaktyvumas nustatomas atitinkamame skaitiklyje (beta arba gama spinduliuotė):

spinduliuotės intensyvumas yra tiesiogiai proporcingas surištų antigenų ir antikūnų molekulių skaičiui.

At kietosios fazės RIA versija vienas iš reakcijos komponentų (antigenas arba antikūnai) yra sorbuojamas ant kieto pagrindo, pavyzdžiui, polistireno mikroplokštelių šuliniuose. Kitas metodo variantas yra konkurencingą RIA. norimas antigenas ir radionuklidais pažymėtas antigenas konkuruoja tarpusavyje, kad surištų ribotą imuninio serumo antikūnų kiekį. Ši parinktis naudojama antigeno kiekiui tiriamojoje medžiagoje nustatyti.

RIA naudojama identifikuoti mikrobų antigenus, nustatyti hormonus, fermentus, vaistus ir imunoglobulinus, taip pat kitas medžiagas, esančias tiriamojoje medžiagoje nedidelėmis koncentracijomis - 10~ |0 -I0~ 12 g/l. Metodas kelia tam tikrą pavojų aplinkai.

Imunoblotingas

Imunoblotingas (IB)- labai jautrus metodas, pagrįstas elektroforezės ir ELISA arba RIA deriniu.

Antigenas išskiriamas naudojant elektroforezę poliakrilamido gelyje, po to perkeliamas (blotingas - iš anglų kalbos. dėmė, dėmė) nuo gelio ant aktyvuoto popieriaus arba nitroceliuliozės membranos ir sukurta naudojant ELISA. Įmonės gamina tokias juosteles su „dėmėmis“

antigenai. Ant šių juostelių tepamas paciento serumas. Tada, po inkubacijos, pacientas nuplaunamas nuo neprisijungusių antikūnų ir užtepamas serumas prieš žmogaus imunoglobulinus, paženklintus fermentu. Ant juostelės susidaręs kompleksinis antigenas + paciento antikūnas + antikūnas prieš žmogaus Ig aptinkamas pridedant substratą/chromogeną, kuris keičia spalvą veikiant fermentui (13.12 pav.).

IB naudojamas kaip ŽIV infekcijos diagnostikos metodas ir kt.